Medicina / Ciências Médicas e da Saúde Dissertações de Mestrado
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Dismútases do anião Superóxido nas células do cumulus oophorus humanas
Autor:
Liliana Raquel Casais de Matos
Mestrado em Medicina e Oncologia Molecular Faculdade de Medicina
Universidade do Porto
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Resumo
As técnicas de Procriação Medicamente
Assistida (PMA), enquanto meios terapêuticos da infertilidade, possuem
uma eficácia ainda aquém do desejável, por limitações técnicas, e
associadas à qualidade de gâmetas e embriões. Dada a impossibilidade de
analisar o ovócito sem o inutilizar, a avaliação do seu meio envolvente
poderá auxiliar na previsão da sua qualidade. Admite-se que as células
do cumulus oophorus (CCO), pela sua relação íntima e persistente com o
ovócito, influenciam a sua qualidade e capacidade de fertilizar. Uma das
acções exercidas será proteger o ovócito contra danos causados pelas
espécies reactivas de oxigénio. O stress oxidativo está envolvido em
processos fisiológicos e patológicos da reprodução, mas é incerto o
mecanismo que medeia a sua intervenção, bem como o papel que exercem os
diferentes intervenientes (oxidantes e antioxidantes). Um destes é a
enzima Dismútase do anião Superóxido, em particular as suas isoformas
intracelulares, o que leva a formular a hipótese de ela contribuir para
o efeito protector do ovócito exercido pelas CCO no ser humano; nesse
âmbito, poderá vir a tornar-se um factor preditivo do sucesso da PMA.
Para verificar a hipótese, começou-se por optimizar as condições de
cultura dessas células e estudaram-se a actividade e expressão da enzima
em diferentes situações clínicas de infertilidade. As CCO humanas
utilizadas foram obtidas durante os procedimentos de PMA
Índice
ÍNDICE GERAL INTRODUÇÃO 1. O ovário humano 1.1. Anatomia
1.2. Ciclo menstrual 1.4.1. Aspectos morfológicos 1.4.2. Regulação do crescimento folicular 1.4.3. Crescimento e maturação ovocitária 1.5. Cumulus Oophorus 2. Procriação Medicamente Assistida 2.1. Infertilidade 2.2. Técnicas de Procriação Medicamente Assistida 2.3. Eficácia da aplicação das técnicas de PMA 3. Stress Oxidativo 3.1. Espécies Reactivas de Oxigénio
3.2. Antioxidantes 4. Objectivos MATERIAL E MÉTODOS
1. Recolha e obtenção de células de
cumulus oophorus 2.1. Imunocítoquímica para detecção de CuZnSOD e MnSOD 3. Morfologia Ultra-estrutural 4. Estudos Bioquímicos 4.1. Avaliação da viabilidade celular e contagem das células 4.2. Obtenção de homogeneizados 4.3. Quantificação da actividade da SOD 5. Análise Molecular 5.1. Preparação das amostras para SDS-PAGE 5.2. SDS-PAGE 5.3. Western blotting 6. Análise Estatística RESULTADOS
I. Número de células e viabilidade celular V. Quantificação da actividade da SOD VI. Detecção e quantificação da CuZnSOD e MnSOD DISCUSSÃO CONCLUSÕES REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
COMUNICAÇÕES ASSOCIADAS AO PRESENTE
TRABALHO
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